①Hybridization solutionを作製する。（例：200 mL）
1	50 % de ionized formamide 88 mL
2.	5×denhardts solution 20 mL
3.	10 % Dextran sulphate Na salt 20 g(溶けにくい！)
4.	5×SSPE 50 mL
5.	1 % SDS 20 mL
始めに1-4まで液を作ってから最後に5を行うのが好ましい。（泡立つため） 　　 1-4の作製の際には3の粉が溶けにくいため42 ℃で温めながら行うとよい。
↓	1-5まで完了したら混合
↓	salmon sperm DNA(ss DNA)2 mLを95 ℃, 5 min後 on ice 5 min
↓	42 ℃に保温
②Pre hybridization
↓	トランスファー済の乾燥membraneをRO水に浸す。（500mLほど）5 min
↓	5×SSCに浸す、5 min
↓	ガラス筒の中にmembraneを入れ、30 mLずつHybridization solutionを入れる。混合。（membraneがガラス面によく引っ付くようにする）
↓	42 ℃、2時間ハイブリダイゼーションオーブンで攪拌。
③probe作製
↓	1.5 mLチューブにDNA 12.5 ngを1 μL、primer 1 μL、MillQ 5 μL入れる。
↓	95 ℃、3 min後on ice（氷水）5 min
↓	×10 Buffer 1.25 μL　dNTP 1.25 μL入れる。
↓	標識dNTP 2.5 μL加える。（ここからはRI室で行う）
↓	Exo free klenow Fragment 0.5μL入れる。
↓	37 ℃、10 min
↓	ペーパークロマトグラフィーによるprobeチェック
↓	ペーパークロマト試験紙に赤い点で印を付ける。
↓	その点に1 μL probeをつける
↓	赤点につかないようにギ酸アンモニウムをつけ1 分間静置。
↓	サランラップにはさみ、現像する。
↓	95 ℃、3 min
↓	氷水で急冷
④Hybridization
↓	氷上で急冷した後、100 μLのTEを作製したprobeの中に入れて溶かす。
↓	あらかじめ30 mL Hybridization solutionを入れておいた50 μLチューブの中に50 μLずつ先ほどのprobe入りのTEを入れる。
↓	ふたを閉めて、思い切りふりmembraneに染込ませる。
↓	オーバーナイト42 ℃、Rotation（ハイブリオーブンで）
↓	0.3% SSC、0.1% SDSを適当量いれ、タッパにmembraneをつける。それを50 ℃に保ったインキュベーターに5 min程入れる。この操作を3回行う。
↓	membraneをタンパク面を上にしてフィルターの上に乗せ、サランラップで巻き、カセットに入れる。
↓	暗室でフィルムを切ってカセットの中にしっかり入れる。
↓	－80 ℃で数時間保存
↓	現像する。