1. 遠心分離により得たP3画分にhomogenize bufferの1/10量のsolubilize bufferを加え、Dounce type homogenizerを使い（40 strokes）、十分に懸濁した後、静かに攪拌（40 min, 3/4 rpm, 4℃）。
2. 超遠心により、未破砕画分を沈殿させる（200,000 g, 30 min, 4℃）。
3. 上清を分取し、タンパク質濃度を 2 mg/mlに調整する。（total vol.:200 μl）
4. Protein A Sepharose（10-20 μl）を加え、静かに攪拌（1- hr, 3/4 rpm, 4℃）。
5. 抗体（抗体/タンパク質：15- μg/1,500 μg）を加え、静かに攪拌（1-hr, 3/4 rpm, 4℃）。
6. Protein A Sepharose（10-20 μl）を加え、静かに攪拌（1- hr, 3/4 rpm, 4℃）。
7. 洗浄（軽いボルテックスなら可）。5回洗浄した後、新しいチューブへ樹脂を移す。
8. 洗浄（軽いボルテックスなら可）。さらに5回同様に洗浄する。最後の洗浄はfinal wash bufferで行う。
9. Sample buffer（30- μl）を入れboil（3 min）。

参考文献

1. タンパク実験プロトコール（pp.151-157）
2. 分子間相互作用解析ハンドブック（pp.40-44）
3. タンパク実験ハンドブック（pp.47-52, 234-238）