準備するもの
　　　　【器具】

• PCR機 (Takara PCR Thermal Cyclerなど)
• PCR用チューブ
• ヒートブロック
• オートシークエンサー (ABI 310 など)

　　　 【試薬】

• BigDye Terminator? v1.1 Cycle sequencing kit (Applied Biosystems)
• 任意のプライマー (1.6μM)
• Hi-Di (ホルムアミド溶液)
• 100% EtOH, 70% EtOH
• milliQ

1. 目的の遺伝子を組み込んだプラスミドDNAを調製する。DNAは1サンプルにつき ?500ng 必要。
2. 下の様に反応液を混合する。
   
3. 下のサイクルでPCR 反応を行う。
   Takara PCR Thermal Cyclerの場合
   96 ℃ 　　1分　　　1サイクル
   96 ℃　 30秒
   50 ℃　 15秒
   60 ℃　　2分　　 25サイクル
4. PCRが終了したら、反応液に100% EtOH 64μl、MQ 26μlを加えよく撹拌し、室温で15分静置する。
5. 15,000 rpm、15分間、室温で遠心分離し、上清を捨てる。
6. 70% EtOH 100μlを加え、15,000 rpm、10分間、4℃で遠心し、上清を捨てる。
7. 沈殿を乾燥させ、Hi-Di 20μlを加え、ピペッティングにより沈殿を溶解させる。
8. 95℃、2分間加熱し、すぐに氷中に戻す。
9. オートシークエンサー (ABI 310) にかける。