試薬(Final concentration):
3% Paraformaldehyde 架橋能力が高くないが、低分子で浸透性が良いので、迅速な固定のために併用されることが多い。
(一般のホルマリン溶液では、安定剤にメタノールが入っているので×。パラホルム粉末(電子顕微鏡用)から調整するか、電子顕微鏡用に市販されているものを購入する。)
2.5% Glutaraledhyde アルデヒド基を分子の両端に持ち、タンパク質を架橋する能力が高いので電子顕微鏡レベルでの構造保持には大変有用。
(25% 溶液10 ml入りのアンプルを購入して、固定する直前に開封。開封してから日数が経つと固定力が弱まる。)
0.1 M Cacodylate buffer (pH7.4)
(Sodium Cacodylate TrihydrateをHClでpH調整するかWAKOよりCacodylate
solution を購入。)
Preparation用溶液
(mM):
142 NaCl, 5 KCl, 2.5 CaCl2, 2 MgCl2, 10 HEPES,
10 glucose (pH7.4 with NaoH)
上記の固定液で固定をすれば、駒崎先生が光学顕微鏡・電子顕微鏡のいずれでも観察して下さる。電子顕微鏡用に作成した標本をエポン樹脂切片、トルイジンブルー染色して光学顕微鏡観察する。 |